2022-12-17 14:44来源:m.sf1369.com作者:宇宇
铝模板安装原则:
先墙柱、后梁板、先内墙、后外墙、先中间、后四周、先调平、后装模、先校正、后紧固、先复查要点再进行施工。
施工工序:
测量放线→墙柱钢筋绑扎→墙柱水电预埋→墙柱钢筋及水电预埋验收→焊接定位筋→安装墙柱一侧铝模→安装水泥内存条、套管和螺栓→安装墙柱另一侧及两端铝模→架设顶托、安装梁底铝模→对齐墙柱及梁底铝模边线→安装梁侧铝模和板阴角龙骨→架设顶托、安装平板龙骨→安装平板铝板→安装阳台、飘板和公共部位铝模→安装威令加固墙柱铝板→调整梁底和平板标高→安装斜撑调整墙柱垂直度→梁板钢筋绑扎及水电预埋→安装降板沉箱及完善线条铝模→铝模、钢筋、水电验收→楼面砼浇筑→板厚、墙柱边平整度、墙柱垂直度及平板极差跟踪实测
铝模安装步骤及控制要点:
1、楼面投放墙柱边线及墙柱边控制线,墙柱线投放应超出墙柱边200mm,控制线离墙柱边线200mm为宜,以便检查墙柱铝模是否偏位,引好楼层标高。
控制要点:放完线必须有专人进行复核。
2、绑扎墙柱钢筋,预埋墙柱上电线线管和线盒,预埋厨卫间墙柱上水管压槽,水管压槽铁片提前制作好并固定在铝模墙柱板上。
控制要点:钢筋绑扎是否符合要求,并通知监理甲方验收,检查水电线管是否遗漏,保护措施是否到位,水管压槽铁皮是否固定牢固。
3、挂线检查墙柱边砼面标高是否符合要求,对超高的应凿除,对过低的应用砂浆补平或砂浆垫平。铝模对柱边平整度要求为0~-5mm,砼浇筑时墙柱边砼表面应重点控制,可用铝合金刮平。
控制要点: 检查楼面砼标高是否符合要求,过高或过低是否处理,浇砼时是否用铝合金刮平。
浇砼时墙柱边用铝合金条刮平
超低垫平
超高凿除
4、墙柱边四角及中间采用10cm短钢筋焊接定位钢筋,或钻孔打定位筋。
控制要点:检查定位钢筋是否准确、合格,有无遗漏。
5、拼装墙柱一侧铝模,外墙柱先拼装外侧,墙柱板安装前先刷脱模油,安装上套管和螺栓,套管上必须绑扎同墙柱厚的钢筋内存条。
控制要点:检查钢筋内存条宽度是否符合要求,检查套管上是否绑扎钢筋内存条。
6、拼装墙柱另一侧及两端铝模,墙柱铝模拼装中飞镖子弹全满打,以免给后期补打增加工程量,上好螺栓螺帽。上好螺帽主要是防止铝模施工中墙柱内螺栓及套管滑脱。
7、拼装梁底及梁侧铝模,以户为单位,从边上往中间拼装,安装好梁底顶托应垂直并初步调平,调整及对齐墙柱铝模边线,挂垂线检查梁底是否对齐柱边线,此时墙柱边不对齐,后期模板容易出现整体往一侧偏移。
控制要点:梁起连接各柱子的作用,墙柱边线的对齐检查,梁底边线挂垂线是关键,否则后期出现整体偏移就无法纠正。
8、安装墙柱梁顶部C槽,此C槽连接平板和梁柱,与C槽连接的墙柱、平板每块板飞镖子弹至少设置两颗,相邻两个插销的间距不能超过 300mm,与墙柱梁及平板的拼接必须严密无错台,后期实测垂平此处最容易爆点。
控制要点:检查C槽与墙柱梁及平板飞镖子弹是否设置到位,拼接是否严密。
9、安装板龙骨和顶托,顶托立杆应垂直并初步调平,安装平板,平板从一头拼向另一头,平板两头的飞镖子弹至少设置两颗,相邻两个插销的间距不能超过 300mm。
控制要点:检查顶托立杆是否垂直和初平,平板两头的飞镖子弹是否设置到位。
10、安装外阳台、飘板、公共部位和楼梯铝模。外阳台、飘板、公共部位的顶板必须按楼层标高调平,这几个部位容易忽视,会给后期精装移交带来后患。
11、调平平板,以房间为单位,用红外线根据楼层标高逐一调整平板底和梁底立柱,先调墙柱位置平板,再调中间平板,直至该房间平板符合实测实量标准。房间平板调完后再调外阳台、飘板、公共部位的顶板。
立柱为可调式立柱,先大致顶紧再用中间的微调螺纹微调。立杆在调的过程中,先调的立杆部分会松动,每房间平板调整好后应检查平板和立杆有无松动。
控制要点:平板开始调平时,先根据楼层标高检查墙柱边的顶板标高,如果低于楼层标高就必须先把墙柱边的平板调平,可千斤顶顶起平板,再用垫块垫平墙柱铝板根部。如果高于楼层标高又无法降低标高时,只能按最高处调平,如果偏差较大时,可通过房间梁的位置借1cm左右。
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2、加固柱子,两人协同安装柱子威令,上好垫片并紧固好螺帽,有转角的墙,应安装角部螺栓,螺帽紧固不能过紧或过松, 过紧垂平保证不了,过松容易爆模。
控制要点:站在侧面检查威令是否弯曲可判别螺帽是否过紧。
13、安装柱子两侧斜撑,斜撑采用两头加可调顶托,不得采用钻孔打钢筋头方式固定(钻孔容易钻通楼板给后期精装移交带来隐患。
挂长垂线,检查每面墙两头和中间位置,检查每处上口、中间、下口的垂直度偏差大小,调节顶托,直至符合实测要求,转角短墙不要遗漏,调完柱垂直度后用葫芦拉紧的外阳角。
控制要点:检查顶托是否顶紧,按控制线或边线检查墙柱根部是否偏移,复查垂直度是否在实测范围内。检查葫芦是否拉紧。
14、刷脱模油,采用厂家铝模专用脱模油,脱模油的厚薄应均匀。墙柱铝板的脱模油在拼装前完成涂刷,平板及梁底的脱模油在平板安装好、钢筋安装前完成涂刷,严禁使用废机油作脱模,废机油作脱模油会吸附在砼表面,后期粉刷易空鼓。
15、预埋水电线盒和预留洞,所有电线盒、地漏、大便蹲坑均在铝模上定好位,采用自攻螺丝固定在铝模上,地漏、大便蹲坑采用止水节。所有立管、空调洞均在铝模上开孔预埋。此做法优点:定位精准,后期无渗漏隐患,省工。
16、安装梁板钢筋,预埋水电线管,安装降板沉箱,完善上反线条模板。通知监理、甲方验收模板、钢筋,水电预埋。
17、铝模验收检查,检查墙柱、梁、平板的飞镖子弹是否遗漏,重点检查墙身板与平板连接处,墙身板根部与角铝连接处及墙身板与梁侧板的连接处。检查垂直度是否符合实测要求,检查立杆是否垂直,有无松动。检查墙柱两侧顶托是否顶紧。
18、浇筑砼,先浇墙柱砼再浇梁板砼。墙柱砼分2次浇筑完,以免爆模。浇砼前先用砂浆封堵铝模墙柱根部缝隙以免漏浆,铝合金板面必须用水湿润。
控制要点:检查墙柱根部是否采用砂浆封堵,板面是否湿水。
19、砼浇筑时的实测跟踪修正,此环节非常重要,直接影响实测成绩和后续施工。
实测人员由4人组成,2个管理人员,2个施工人员,此人员必须固定。分工为:管理人员1个在楼面上检查板厚和墙柱边标高及平整度,1个在楼面下检查实测墙柱垂平和顶板水平极差。施工人员1个跟踪打泵的位置,因振捣部分飞镖子弹会松动掉落及时补充, 1个跟踪实测调整。
墙砼实测修正,每浇筑完一根墙柱立即检查垂直度,调节墙柱两侧顶托或紧固螺栓。
平板水平度修正,每浇完一板块后立即采用激光仪逐一检查立杆位置顶板, 调节中部螺口或借助千斤顶顶升。
板厚及柱边标高平整修正,每浇筑完一板块立即采用板厚检查器检查板厚,用卷尺和铝合金尺检查墙柱边砼标高及平整度。
1、严格按照各种文书写作的规范要求。不同种类的公文都有自己固定的格式,都要严格按照它们的要求完成。
2、言简意赅,力求用最少的言语表达最丰富的内容。公文,属应用文体,与日常写作的艺术抒情类文体在语言风格上有差别。公六要求严格按照既定模板填充内容。
3、注意公文的行文规范。公文在行文方面也有讲究,不反是程序上的要求,还有社会中行为的潜规则。比如通知,它应该是怎么传送出去,先经谁的手,还要通过什么批准,最后抄送给那些机关。
近年来,生态旅游是非常流行的旅游方式,它将生态、旅游进行了完美结合,是旅游方式的升级。农业生态旅游作为一种新兴的人文旅游的发展模式,是建立在本土农业文化的基础之上,对原生态农作物景观进行创新的生态设计前提下的旅游开发。生态设计在农业生态旅游规划中越来越重要,并成为旅游规划中的亮点。山西晋祠农场生态观光园项目定位是依托农业生态为本底,以商务休闲为主,养生、度假、娱乐等为辅的发展模式。景观设计中充分重视各层次、具体项目的生态设计,包括丰富景观群落的生态设计,单体建筑形制、材质的生态设计,以及具体景观项目等的生态设计,处处体现生态上的考虑与创新。 一、生态设计的概念 生态设计,也称绿色设计或生命周期设计或环境设计,指按生态学原理进行的人工生态系统的结构、功能、代谢过程和产品及其工艺流程的系统设计。是将环境因素纳入设计之中,从而帮助确定设计的决策方向。生态设计要求在产品开发的所有阶段均考虑环境因素,从产品的整个生命周期减少对环境的影响,最终引导产生一个更具有可持续性的生产和消费系统。生态设计遵从本地化、节约化、自然化、进化式、人人参与和天人合一等原则,强调减量化、再利用和再循环。 主要包含两方面的涵义,一是从保护环境角度考虑,减少资源消耗、实现可持续发展战略;二是从商业角度考虑,降低成本、减少潜在的责任风险,以提高竞争能力。以生态和谐为特点的景观,形成绿色生态,环保节能效应,是旅游景观的基本要求,相应的景观生态技术,包括生态材质运用,本土化植物配置,低耗能技术应用,绿色植物环境,环保材料与技术等等,对于旅游景观设计特别重要。这就是景观设计的“生态化趋势”。 二、生态设计在旅游开发中的应用形式 1、生态设施:即设立与生态环境相配套的服务设施。 2、生态能源:即直接利用风能、太阳能、生物质能(沼气) 等最本初的能源,尽可能提高能源的转化效率,方便利用与使用,同时充分利用景区内的水资源。 3、生态材料:即采用既具有令人满意的使用性能,又被赋予优异的环境协调性材料。 4、生态技术:科技含量高、学科领域广泛,并按照资源和环境两个要求共同改造重组所做成的新技术。 5、生态建筑:即采用生态技术并使用生态环境材料建造的,与自然环境高度融合的建筑。 6、生态景观:与环境和谐共生并采用生态技术和材料建造的景观。 三、生态设计在旅游中应用的案例 国际上,著名的发展模式有肯尼亚生态旅游发展模式。该模式注重与当地居民进行利益分享,生态设计也在旅游规划开发中发挥的淋漓尽致。园林景观规划中,在最大限度保护好原有生态环境的前提下,使用当地树种营造出丰富的植物群落景观,也为当地生物提供原始生态的生存环境。建筑设计上,控制建筑单体的建设范围与数量、体量,全部采用本土木材,依照当地建筑形制,使用太阳能、风能等洁净能源。包括水资源的供应与使用,食物的烹调,蔬果的保存,垃圾的收集与处理等处处体现了生态设计。肯尼亚生态旅游业已经成为肯尼亚国民经济主要创汇行业,也为当地环境保护和百姓生活做出巨大贡献。 在国内,九寨沟风景区算得上是发展生态旅游的典范,生态设计也在其旅游开发中得到了充分利用。它的发展理念和发展模式较先进,有开创性和前瞻性,符合可持续发展观,生态保护理念。在增加旅游收益的同时促进景区生态环境的保护以及当地居民生活条件的改善,景区因此形成了一个良性循环的发展模式。 四、生态设计在晋祠生态观光园中的应用 1、生态景观设计方面 山西晋祠农业生态观光园的景观设计,在保留并发挥当地本土农业景观、自然景观及历史文化景观独特性的同时,开发与之和谐的有吸引力的旅游景观,并使之主题化、情景化、生态化、游乐化和动态化。 主题庄园区作为整个园区景观设计的核心,将农业文化融入景观设计的同时,充分体现人工建造物作为旅游吸引物,在旅游项目中具有独特性。主题庄园以葡萄、桃花、杏花、薰衣草、玫瑰等五种适宜当地生长的农业种植物为主题,通过对其大面积种植来体现农业景观,并在庄园里建造与种植物有密切关系的造型别墅,如在杏花庄园,卧牛于庄园入口,满园杏花烂漫,木屋别墅于其中,当置身于此情此景之时,使人不自觉的想起“清明时节雨纷纷,路上行人欲断魂。借问酒家何处有,牧童遥指杏花村”的安逸与洒脱的生活。园区内的假山窑洞宾馆是用疏通水塘的泥土堆砌而成的一座人工小山,利用其在园区内为观景制高点的优势,在小山的内部空间修建成特色的假山—窑洞宾馆。主题化的酒店餐饮、奇异的建筑是旅游接待设施在景观上不同于城市商务型接待设施的体现。假山窑洞宾馆是园区内独特性的旅游接待设施景观的体现。 在园区内,无论是引导指示系统,还是休憩服务系统和功能性建筑都与本土自然农业景观及人文景观高度协调。并从属于观光景区的各项核心景观,从材质和造型上不仅与核心吸引物相互协调,并成为提升核心景观不可或缺的从属景观,使之相辅相成。入口大门以石头堆砌,门前植桃花,营造山有小口桃花鲜美落樱缤纷的美丽景色,随之出现的水车不停转动浇灌农田,使人顿时置身于淳朴自然的乡村恬静生活的情景。各个庄园的木屋别墅,造型别致突出庄园特色主题,体量上又能满足其使用功能,严格控制其规模的前提下,与自然的农业景观协调统一。园区内的“旅游景观”之所以区别普通的景观设计,在于整个园区的景观,本身就是旅游吸引力的重要组成部分,甚至是其最重要的部分,是项目的基础或卖点。因此,园区的景观设计,必须服务于整个园区的“主题”定位,在主题整合下,形成项目的独特吸引力,凸显“独特性卖点”,形成主题品牌。 2、晋祠生态园内生态景观具体项目方面 体现旅游景观生态化的项目,有生态迷宫(花卉迷宫、果蔬迷宫、湿地迷宫、水景迷宫、树林迷宫等等)、森林氧吧和森林浴场、大型树屋、大地艺术、空中花园等等。把生态造景与生态游乐结合起来,用绿色植物进行造景、制造游乐项目、打造游憩模式。 山西晋祠农场生态观光园项目中,芦苇迷宫、树屋别墅、湿地庄园、养生林等都是很好的生态景观建设项目。养生林带是根据对植物发挥气体的分析表明,不同树种的杀菌和清新空气的保健功能不同,根据五行、五脏、五方和对应树种的养配关系,将农场周围的绿化隔离带设计成为具有特殊养疗功能的景观林带,划分为“金、木、水、火、土”五组林带,栽种到不同的区域和方位。比如肝属木,对应五方中的东和东南向,具有养肝效果的名贵树种为乌柏、水杉、华樟、黄檀等,则在这一方向栽植、培育以杨树为主要构景元素的绿化隔离带。其它四个方向依次配置为相应的养心林带、养脾林带、养肺林带和养肾林带,总体上形成五个方向上绿化林带环绕农场的特色防护隔离景观带。 3、生态园中的生态建筑方面 随着城市生活压力的增大,回归大自然成为一种潮流,如何打破陈规,将死板的水泥钢筋建筑,转变成人们向往的、野味十足的生态休闲度假建筑,是山西晋祠农场生态观光园项目度假区成功与否的关键。最终将主题庄园及诗情画意的农耕文化为商业卖点,让人们有一种更容易接近的亲切感受。 园区的建筑总体设计也时刻体现原生态理念:整个园区的中间部分是由五大中心主题庄园和标志性建筑构成。除了主题建筑外,在园区四周还布置着湿地庄园建筑和木屋、树屋、隧道、石屋、原生洞穴等等都是园区的配套设施,还建设了立体生态别墅区建筑群,别墅布局是三维立体生态结构,地上地下屋顶空中皆为绿化设计,地下生态花园,通过对高度调节气温的原理,还可以引种外来物种植物,形成新的生态景观。 山西晋祠农场生态观光园项目设计的主旨是:让游客在优美的农业生态文化体验享受、在野趣中领略刺激。在项目中包括九大概念建筑,稻田里长出来的房子、与小鸟做邻居的房子、田鼠挖的房子、种出来的房子、跟着季节“走”的房子、主题农业特色庄园建筑等等。 (1)从稻田里长出来的建筑 从稻田里长出来的建筑主要传递出自由生长的理念,平和、宁静的稻田,设计成一个个可流动的集装箱,架空于农田之上。为了便于安装,采用简洁的单体形式,充分展示,在单体立面上反映太原特色和民居情调。同时,为避免大规模现场施工造成人为破坏,建筑可采用预制构件,运到现场安装。运用装配式的集装箱具有流动性和生长性的特点,根据具体需要可随时生产安装甚至移动。 (2)与小鸟做邻居的房子 与鸟为邻,设计生态鸟屋,布置在屋顶平台上,安放在楼下地角边,悬挂在屋檐下,窗口处放置喂鸟瓶,吸引小鸟前来居住,房屋四周布置盆裁,在阳台上边泡茶,边观赏千姿百态的小鸟,体验 “市花荫下鸟啁啾,同道品茗心神悠;闲来观鸟书一卷,伴我春夏与冬秋”的境界。 (3)田鼠挖的房子 从稻田里田鼠身上获得灵感,形成了全覆土的生态建筑,稻黄色、有情趣,在一望无际的稻田上,像田鼠的家一样,内部像一个迷宫,成为一个旅游吸引物。“红石大门”,利用当地石材,形成特色形态大门,意境独特。 (4)种出来的房子 墙基为农场的当地卵石,房屋外墙就是脚下的生土,20%的黃泥、5%的石灰,模板夯实。四根主梁为速生杉木,一层地面是当地的石板,二层的楼板和屋顶也是杉木,两层屋顶之间用粽叶、谷壳、芦花等做隔热材料。夏天井水送上屋顶花园降温后回到一楼的水箱冲洗厕所。冬天厨房的土灶燃烧竹产品的废料做饭供热。轻盈的油毡屋面减轻了梁和柱的承重,再生能力极强的速生杉树足以应付。 房子的主要材料均来自脚下的土地,当不需要的时候,推倒后,依然是脚下的土地。就像庄稼一样,收获这后的一枝一叶就回归土地。预计造价为5万元,材料清单里不包括任何钢筋水泥,整幢房子的材料不消耗能源、不排放温室气体。房子呼吸着空气,空气滋润着房子,像一枝植物静静地站在田野里。 (5)树屋,树上的空中楼阁 当厌倦了都市的喧嚣与烦躁,打算过另一种生活时,在郊区里寻找一座适用于建度假小屋的环境,就是度假树屋理念。树屋是一个全新的概念,是一种筑在树上的小木屋,从远处观望,仿佛空中楼阁般神奇。各种形式的表现使建筑风格不一,各具特色。 五、小结 随着“人与自然和谐共处”的理念进一步深入,人们对旅游越来越强调生态模式,自然生态也是郊野最引人入胜之所在。晋祠农场生态观光园最大限度的引入生态设计,将生态与旅游开发更有机的结合。其中整个景区的景观规划设计中对当地本土农业景观的保留并发挥,以及对独特的自然景观及历史文化景观性的挖掘;生态景观项目中,芦苇迷宫、树屋别墅、湿地庄园、养生林等原生态建设;生态建筑中稻田里长出来的房子、与小鸟做邻居的房子、田鼠挖的房子、种出来的房子、跟着季节“走”的房子、主题农业特色庄园建筑等等,都充分体现了整个生态园项目中对生态环境的尊重与充分的生态设计。意在使晋祠生态园自然生态环境与人工生态环境自然融合,让生态设计效果达到“虽由人做,宛如天成”,更适合旅游者的需求。
混凝土预制构件模板拆除时的混凝土强度,应符合设计要求;当设计无具体要求时,应符合下列规定:
1)侧模,在混凝土强度能保证构件不变形、棱角完整时,方可拆除;
2)芯模或预留孔洞的内模,在混凝土强度能保证构件和孔洞表面不发生坍陷和裂缝后,方可拆除;
3)底模,当构件跨度不大于4m时,在混凝土强度符合设计的混凝土标准值50%的要求后,方可拆除;当构件跨度大于4m时,在混凝土强度符合设计的混凝土强度标准值的75%的要求后,方可拆除。
1、纸样是指用纸做出的模型。
纸样一词是服装工业中专用的词语,是把立体服装平面化的一种很好的表现方法。服装纸样设计是服装结构上的设计,它虽然有别于服装造型的设计,但它是构成服装造型设计的基础。2、样衣: 服装的实际样品。分为两种: (1)企业自主设计试制的新款样品,供客户选样订购; (2)按客户要制作并经客户确认的样品,体现设计意图和原作精神的样衣是设计、制板和车缝密切配合、反复修改、不断完善的集体劳动成果。3、样板:起着模具、图样和型板的作用,是排料画样裁剪和产品缝制过程中的技术依据,也是检验产品规格质量的直接衡量标准。样板是以结构制图为基础制作出来的,称为打制样板,简称制板。4、打板:根据设计师的意图在纸样上将服装分解成衣片,绘制成结构图(纸样),包括身,袖,领等。纸样经过校验后放在面料上,按照纸样的轮廓裁剪成衣片,将衣片进行缝纫后做出成衣。
建筑模板材质有钢、钢木、木、塑料复合等。
组合式钢模板,是现代模板技术中,具有通用性强、装拆方便、周转次数多等优点的一种“以钢代木”的新型模板,用它进行现浇钢筋混凝土结构施工,可事先按设计要求组拼成梁、柱、墙、楼板的大型模板,整体吊装就位,也可采用散装散拆方法。
铝模板,铝合金制作的新型建筑模板,建筑行业新兴起的绿色施工模板,以操作简单、施工快、回报高、环保节能、使用次数多、混凝土浇筑效果好、可回收等特点,被各建筑公司采用。
建筑模板是一种临时性支护结构,按设计要求制作,使混凝土结构、构件按规定的位置、几何尺寸成形,保持其正确位置,并承受建筑模板自重及作用在其上的外部荷载。进行模板工程的目的,是保证混凝土工程质量与施工安全、加快施工进度和降低工程成本。
模板工程技术要点
木模版:制作、拼装灵活,适用与外形复杂、异性混凝土结构及冬季施工的混凝土工程。
钢大模板的优点是模板整体性好,抗震性强,无拼缝等;缺点是模板重量大,移动安装需起重机械吊运。
组合钢模板:轻便灵活、拆折方便、通用性强、周转率高,缺点:接缝多且严密性差,导致成型后外观质量差。
模板工程设计原则:
1. 实用性
2.安全性
3.经济性
模板工程设计的三点:
1.模板面
2.支持体系
3.连接件
依据广东建筑与装饰工程2010定额的计算规则,梁板的支模高度3.6m内时,套用支模高度3.6m相应子目,超过3.6m时,超过部分按相应的每增加1m以内子目计算。
这里标高为5.2m,也就是说这部分的梁板模板都是超过3.6m范围的,70.66的工程量就是超过部分的,套用定额:3.6m的定额子目(工程量:70.66)+每增加1m的定额子目*2(5.2-3.6=1.6,不足1m,定额没说明,也按1m计算;工程量:70.66)
这是个人见解,有啥错误望指出,互相研讨学习
就是建筑施工过程中,用于钢筋安装和浇筑混凝土之间的步骤,是为混凝土提供塑形模具、固定其具体尺寸的模板,使混凝土依据模板的约束,形成设计需求的尺寸、形状等,达到设计目的。
建筑支模是代替木方的新型建筑模板支撑结构, 节能、节材、节费、保障工程质量、提高施工效率等优势,“以钢代木”循环使用300余次,每平方米节约成本70余元。
PCR引物设计原则PCR是目前研究DNA、RNA等核酸的非常有效和最主要的方法之一。它的原则主要是在模板cDNA的传统区域内设计方案、引物长短一般在15~30碱基中间、引物GC成分在40%~60%中间,Tm 值最好是贴近72℃、引物3′端要绕开密码子的第3位、引物3′端不可以挑选A,最好是挑选T等等。
首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物不能在模板的非目的位点引发DNA 聚合反应(即错配) ,再次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构。引物设计的原则如下。
1,引物最好是在模板cDNA的传统区域内设计方案
DNA序列的传统区是根据种群间类似序列的较为明确的。在NCBI上检索不一样种类的同一遗传基因,根据序列分析系统核对,各遗传基因同样的序列便是该DNA的传统区。
2,引物长短一般在15~30碱基中间
引物长短常见的是18-27bp,但不宜超过38,由于太长会致使其拓宽溫度超过74℃,不适合TaqDNA聚合酶开展反映。
3,引物GC成分在40%~60%中间,Tm值最好是贴近72℃
GC成分过高或过低都不利引起反映。上中下游引物的GC成分不可以相差太多。此外,上中下游引物的Tm值是寡核苷酸的解链溫度,即在一定含盐量标准下,50%寡核苷酸发夹结构解链的溫度。合理运行溫度,一般高过Tm值5~10℃。若按公式计算:Tm=4(G+C)+2(A+T)可能引物的Tm值,则合理引物的Tm为55~80℃,其Tm值最好是贴近72℃以使复性标准最好。
4,引物3′端要绕开密码子的第3位
如扩增编号地区,引物3′端不必停止于密码子的第3位,因密码子的第3位易产生简并,会危害扩增的非特异与高效率。
5,引物3′端不可以挑选A,最好是挑选T
引物3′端失衡时,不一样碱基引起高效率存有着挺大的差别,当未尾的碱基为A时,即便 在失衡的情形下,也可以有引起链的生成,而当未尾链为T时,失衡的引起高效率大幅度降低,G.C失衡的引起高效率处于A.T中间,因此 3′端最好是挑选T。
6,碱基要随机分布
引物序列在模板内理应沒有相似度较高,尤其是3’端相似度较高的序列,不然很容易造成不正确引起。减少引物与模板相似度的一种方式 是,引物中四种碱基的遍布最好任意的,不必有聚漂呤或聚嘧啶的存有。特别是在3′端不可高于3个持续的G或C,因那样会使引物在GC聚集序列区不正确引起。
7,引物本身及引物中间不应该存有相辅相成序列
引物本身不可存有相辅相成序列,不然引物本身会伸缩成发夹结构使引物自身复性。这类二级结构会因为室内空间位阻而危害引物与模板的复性融合。引物本身不可以有持续4个碱基的相辅相成。
两引物中间都不应具备多样性,特别是在应防止3′端相辅相成重合以避免 引物二聚体的产生。引物中间不可以有持续4个碱基的相辅相成。
引物二聚体及发夹结构假如必然得话,应尽可能使其△G值不必过高。不然易造成造成引物二聚体带,而且减少引物合理浓度值进而PCR反映不可以正常的开展。
8,引物5′端和正中间△G值应当相比较高,而3′端△G值较低
△G值就是指DNA发夹结构产生需要的活化能,它表明了发夹结构构造內部碱基对的比较可靠性,△G值越大,则发夹结构越平稳。理应采用5′端和正中间△G值相比较高,而3′端△G值较低的引物。引物3′端△G值太高高,非常容易在错孤电子对点产生发夹结构构造并引起DNA缩聚反应。
9.引物的5′端能够 装饰,而3′端不能装饰
引物的5′端决策着PCR物质的长短,它对扩增非特异危害并不大。因而,能够 被装饰而不危害扩增的非特异。引物5′端装饰包含:加酶切位点;标识生物素.莹光.地高辛.Eu3+等;引进蛋白融合DNA序列;引进点突变.插进基因突变.缺少基因突变序列;引进启动子序列等。引物的拓宽是以3′端进行的,不可以实现一切装饰。3′端也无法有产生一切二级结构很有可能。
10,扩增物质的多肽链不可以产生二级结构
一些引物失效的首要因素是扩增物质多肽链二级结构的危害,挑选扩增精彩片段时尽量绕开二级结构地区。用相关手机软件能够预测分析可能mRNA的平稳二级结构,有利于挑选模板。试验说明,待扩地区活化能低于58.6lkJ/mol时,扩增通常无法取得成功。若不可以绕开这一地区时,用7-deaza-2′-脱氨GTP替代dGTP对扩增的完成是有幫助的。
11,引物应具备非特异
引物设计方案进行之后,解决其开展BLAST检验。假如与其他遗传基因不具备多样性,就可以开展下一步的研究了。
值得一提的是,各种各样模板的引物设计方案难度系数不一。有的模板自身标准较为艰难,比如GC成分较高或稍低,造成找不着各种各样标准都十分适合的引物;作为复制目地的PCR,由于物质序列相对性固定不动,引物设计方案的挑选可玩性较低。在这样的状况只有委屈求全,尽可能去符合条件。做RealTime时,用以SYBRGreenI法时的一对引物与一般PCR的引物,在引物设计方案上所规定的主要参数是不一样的。
并且引物设计方案时需要充分考虑引物要有不会受到基因DNA环境污染危害的工作能力,即引物应当跨外显子,最好引物能跨外显子的连接头区,那样还可以更合理的不会受到基因DNA环境污染的危害。