2023-11-06 15:26来源:m.sf1369.com作者:宇宇
根据你自己的实尺拿验需要吧,如果是绝对定橘腊量,自然是根据标准陵伍搭品来决定你第一个点的值,如果是相对定量看你想要表达什么意思了,可以是1,也可以是100
给你看篇中文文献:《荧宴塌光定量PCR数据处稿祥岩理方法的探讨》唐永键御凯,贾永义
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2-△△CT方法是实时定量PCR 实验中分析基因表达相对变化的一种简便方法,即相对定量的一种简便方法.本文介绍了该方法的推导,假设及其应用.另外,在本文中我们还介绍了两种2-△△CT衍生方法的推导和应用,它们在实时定量 PCR 数据分析中可能会被用到现在最常用的两种分析实时定量PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量.绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数;相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异
时间分辨荧光分析法(Timeresolvedfluoroisnmunoassay,TRFIA)是近十年发展起来的一测微量分析方法,是目前最灵敏的微量分析技术,其灵敏度高达10-19,较放射免疫分析(RIA)高出3个数量级。
时间分辨荧光分析法(TRFIA)实际上是在荧a686964616fe78988e69d光分析(FIA)的基础上发展起来的,它是一种特殊的荧光分析。荧光分析的利用了荧光的波长与其激发波长的巨大差异克服了普通紫外-可见分光分析法中杂色光的影响,同时,荧光分析与普通分光不同,光电接受器与激发光不在同一直线上,激发光不能直接到达光电接受器,从而大幅度的提高了光学分析的灵敏度。但是,当进行超微量分析的时候,激发光的杂散光的影响就显得严重了。因此,解决激发光的杂散光的影响成了提高灵敏度的瓶颈。
解决杂散光影响的最好方法当然是测量时没有激发光的存在。但普通的荧光标志物荧光寿命非常短,激发光消失,荧光也消失。不过有非常少的稀土金属(Eu、Tb、Sm、Dy)的荧光寿命较长,可达1-2ms,能够满足测量要求,因此而产生了时间分辨荧光分析法,即使用长效荧光标记物,在关闭激发光后再测定荧光强度的分析方法。
平时常用的稀土金属主要是Eu(铕)和Tb(铽),Eu荧光寿命1ms,在水中不稳定,但加入增强剂后可以克服;Tb荧光寿命1.6ms,水中稳定,但其荧光波长短、散射严重、能量大易使组分分解,因此从测量方法学上看Tb很好,但不适合用于生物分析,故Eu最为常用。
如果是realtime做表达量,用excel的制图,将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就可以了。如果你还做了标曲的话,就用制图中的散点图看R2值。
其实这些功能做定量PCR的时候电脑程序应该会自动分析才对。
具体情况具体分析。