博凌科为-为你解答：如果lz确实已经确定该基因SNP位点以及突变型，你可以选择荧光定量PCR进行检测，检测方法是：1、探针设计在突变位置，有几个突变点设计几个（不同突变型需要不同的荧光标记：例如，野生型探针用FAM、其中一个突变点探针用VIC或者HEX、另外的一个突变探针用TET等等）；2、然后在突变点两端设计引物（大概100－150bp就可以了。如果用MGB探针，可以小于100bp）；3、然后就是用能进行GenoTyping的荧光定量PCR仪器了（ABI的7700、7900等都可以）；实验操作么就是常规的荧光定量（Realtime）＋读取分型（Allelic Discrimination）两个操作，按照不同PCR仪器的说明书操作即可；4、分析，就可以用软件分析扩增曲线和分型图谱，两者联合判断该样本的基因型就好了。

首先确定你的试验方法，是用荧光染料还是探针，确定之后，设计引物（如果用探针，还要设计探针），然后确定你的实验方案，是否做梯度，是否做重复，是否有待优化等等，然后根据设计加入体系，然后PCR仪进行运行，分析结果。

实施荧光定量PCR的原理及使用方法

荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。原理： PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。