如果有标准曲线，按照标准曲线计算。一般都是相对量。则用delta delta CT方法来计算。举例如下：对照组基因A的CT值为20， 内参（比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。首先算加样量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍，所以4处以2=2，最后的相对量是2倍。几点注意： 1。必须确定扩增的特异性 2。 只有相同目标的CT值才能相减（扩增效率有可能不同） 3。 2的某次方只是理论值，实际扩增效率低于2。 4。 最好不用Syber Green

实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。基线在PCR扩增反应的最初数个循环里，荧光信号变化不大，接近一条直线，这样的直线即基线。光域值threshold的设定，一般将PCR反应前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值是PCR3-15个循环荧光信号标准差的10倍，荧光域值设定在PCR扩增的指数期。CT值表示每个PCR反应管内荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。研究表明，各模板的CT值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，CT值越小，反之亦然。融解曲线是用来验证扩增产物特异性的，如果产物是单一条带，融解曲线就会出现一尖峰；如果有引物二聚体或其它非特异性扩增，就会出现至少两个尖峰。扩展资料：时荧光定量PCR仪Real-TimeqPCR常见问题分析：1、无Ct值出现1）检测荧光信号的步骤有误：一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法。则一般在退火结束时或延伸结束采集信号；2）引物或探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性；3）模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；4）模板降解：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。2、Ct值出现过晚（Ct>38）1）扩增效率低:反应条件不够优化，设计更好的引物或探针、改用三步法进行反应、适当降低退火温度、增加镁离子浓度等；2）PCR各种反应成分的降解或加样量不足，3）PCR产物太长：一般采用80-150bp的产物长度。3、标准曲线线性关系不佳1）加样存在误差：使得标准品不呈梯度；2）标准品出现降解：应避免标准品反复冻融，或重新制备并稀释标准品；3）引物或探针不佳：重新设计更好的引物和探针；4）模板中存在抑制物，或模板浓度过高。参考资料来源：中国知网—实时荧光定量PCR的数据分析方法参考资料来源：百度百科—实时荧光定量PCR