2022-04-06 22:53来源:m.sf1369.com作者:宇宇
不同探针有些许差别,但原理一样。简单说:就是在探针上加上荧光素,在Taq聚合酶作用下合成带有荧光素探针的片段,再给它激发光,释放一光波,仪器检测并分析。至于结果:仪器有自动分析功能,会给出一个阈值线。阈值线与荧光曲线的交叉点就是CT值。根据CT值和你使用的试剂盒说明书来判读结果。
所谓实时荧光定量PCR技术 ,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。检测方法1.SYBRGreenⅠ法:在PCR反应体系中,加入过量SYBR荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。SYBR定量PCR扩增荧光曲线图PCR产物熔解曲线图(单一峰图表明PCR扩增产物的单一性)2.TaqMan探针法:探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。服务流程1.客户认真写好订单,提供待检基因相关信息;2.签订技术服务合同,支付预付款(30-50%);3.设计合成定量PCR引物(或客户提供文献引物委托本公司合成);4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反转录;5.PCR预实验,主要检测引物的特异性和扩增效率;6.正式定量实验:对所有样品上机检测;7.实验结果和数据分析,形成报告。收费标准优惠包干价:120元/样/基因(SYBRgreenI法,相对定量)(含RNA提取,反转录,引物合成费用,上机测试费用(3个重复);一个内参免费(内参3个重复) Ct值(Cycle threshold,循环阈值)的含义为:每个反应管内的荧光信号到达设定阈值时所经历的循环数